Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者困难重重缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现人体内自身抗原到显现1改型心血管疾病药理学病症的成果率在儿童时期就有不太好的描述，多个人体内自身抗原感染性的儿童中所有70%在人体内转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的儿童这一分之一减低到84%。比起之下，%药理学1改型心血管疾病一半以上的改型1改型心血管疾病的肺癌机制还并未想得到充分的研究成果。

越来越多的人开始用到分期系统来定义1改型心血管疾病的成果：个体在显现多种人体内自身抗原时重回第1过渡期，显现血糖极其时重回第2过渡期，显现病症时重回第3过渡期。一些多发人体内自身抗原感染性的个体，在1期和2期，成果速度迟，并发展为肺癌的1改型心血管疾病。我们之后描述了一三组在首次监测到多种人体内自身抗原比对后至多于10年无心血管疾病的却是迟成果者，这三组高血压人数多于，但基本特征非常说明。随后，我们发现人体内自身抗原特异性CD8+T细胞膜催化在成果加速的高血压中所基本不共存，但在最近肺癌和长期共存的心血管疾病高血压中所很容易监测到。这不太可能说明了，与成果高血压比起，这些高血压自身免疫催化的调控加强。

早期研究成果说明了，尽管调控性T细胞膜(Treg)数量正常，但心血管疾病高血压共存一些功用缺陷，其中所包括对IL-2的催化能力下降。此外，心血管疾病高血压中所的物理现象CD4+T细胞膜不太可能对调控来得具抵抗性，表现为物理现象T细胞膜的抑止增强，自然显现出的Treg和光阴体显现出的诱发Treg，以及抗原境遇的CD4+T细胞膜中所IL-2催化增强。本研究成果的目的是描述了CD4+调控性T细胞膜(Treg)在一小群却是加速成果者中所的基本特征，他们的中年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以这群人为基础的横向研究成果，在21岁一般而言确诊的高血压亲人中所检查1改型心血管疾病的危险因素。我们之后描述了长期加速成果者的基本特征，他们持续保持多重人体内自身抗原感染性超过10年，但并未显现心血管疾病的药理学病症，迟性或非完成性自身免疫。随后，10名一直持续保持无心血管疾病并情愿提供大量肾脏比对的加速成果者归属于T和B细胞膜功用量化。在目前的研究成果中所，8名迟成果者(SP三组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人体内自身抗原感染性。所有的行动者都受制于1改型心血管疾病成果的1期，尽管一些人随后得不到了人体内自身抗原对某些抗原的深红色，然而，一名高血压已经受制于2期至多于6年，但并未显现药理学病症，一名高血压被诊断为心血管疾病，该高血压72岁，在通过检视科学研究比对时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中所对该NAD完成了单独评估。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，使用多参数流式细胞膜妖术和T细胞膜抑止试验评估NAD中所Treg的频谱、表改型和功用。用到FlowSOM和CITRUS(聚类验、表征和紧接)完成无指导聚类量化，评估Treg表改型。

结果：与卫生NAD比起，来自迟成果体的知觉CD4+T细胞膜的指导聚类显示，触发的知觉CD4+ Treg频谱减低，与糖皮质激素诱发的TNFR相关细胞膜内(GITR)表达出来减低有关。一名HbA1c下降的高血压与成果加速者和冗余的对照三组比起，Treg谱有所区别。功用量化说明了，与卫生NAD比起，来自加速成果体的Treg介导的CD4+物理现象T细胞膜抑止明显受损。表现为对物理现象CD4+T细胞膜CD25和CD134表达出来的抑止减低。

由此可知1 深入的表改型量化显示，CD4+Treg亚改型在迟成果描述符中所减低。由FlowSOM生成的Treg室，组织起来在来自所有NAD的光阴CD4+CD45RA -细胞膜上。根据记号物表达出来验出10个元簇:知觉T细胞膜_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞膜;HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)用到9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个路由代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，来得大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由三组周围上色。每个路由中所的粥由此可知暗示单个记号的表达出来级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以显示整体记号表达出来。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成由此可知，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起之下同位素为每个metacluster箱支线由此可知(同位素> 0.05%)确定为HD和SP三组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞膜(l)。蓝色红色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon除此以外符号秩验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用到CITRUS的预测模改型说明了，Treg频谱的减低是成果加速的标志。分级相关联(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP行动者和冗余的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异性。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的传奇色彩由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来完成分离，模拟FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)三组以及NADSP 606(蓝色)中所CD25+ cd127的频谱统计由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联次子集的箱支线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来准确度后处理，箭头突出的簇被定位为SP和HD描述符之间的不同。(j)箱支线由此可知显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组中所，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的比起之下同位素(分之一)。(k)直方由此可知显示每个簇的表改型(粉红色)和Treg记号比起之下表达出来与背景表达出来(红色);上列，文件系统Treg_3;下面一行，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇中所记号的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon除此以外符号秩验

由此可知3 与卫生献血者比起，成果加速者知觉treg的GITR减低。每个知觉CD4+T细胞膜元簇(知觉T细胞膜_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞膜;HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个表达出来记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的表达出来热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR表达出来接在，显示直方由此可知(c)和统计由此可知(d)。Wilcoxon除此以外符号秩和验，p< 0.07(蓝色)所有NAD包括，p< 0.05(红色)NADSP 606和冗余的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表达出来，从分级相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(蓝色)接在，显示直方由此可知(e)和统计由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon除此以外符号秩验

由此可知4 来自加速成果的CD4+ treg细胞膜依靠物理现象CD4+T细胞膜的能力下降。SP三组用红色的支线和红色暗示，HD三组用黑色的支线和红色暗示，蓝色的支线/红色暗示NADsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜完成分选。CD4+CD25−(应答者)被记号为CFSE, Treg按检视的分之一氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生细胞膜，培植3天后完成流式细胞膜妖术监测。(a-d)与CD4+应答者比起之下应的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止倍数。用到感染性对照(触发的自发细胞膜不含treg)计算抑止倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 物理现象CD4+T细胞膜对加速成果的T细胞膜再生的抑止来得适合于。SP三组用红色的支线和红色暗示，HD三组用黑色的支线和红色暗示，蓝色的支线/红色暗示NADsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜完成分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel记号，treg按检视的分之一氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生细胞膜，培植3天后完成流式细胞膜妖术(CD25反染)和趋化因次子量化。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百份(b)。(c,d) CD25抑止百份(c)和CD134抑止百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中所的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自加速成果次子的再生知觉CD4+Treg在GITR表达出来中所想得到了扩展和非常丰富，强调了促使研究成果Treg在1改型心血管疾病高风险个体中所的表征的合理性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28