Diabetologia：酪氨酸但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现显现出呼吸道自身突变到显现显现出1HG高血压临床病因的实质性率在青少年时期就有很好的描绘出，多个呼吸道自身突变阴性的青少年里有70%在血清切换后10年内患上高血压，而随访15年的青少年这一数量上升到84%。相较之下，占去临床1HG高血压一半以上的HG1HG高血压的患病机制还没有给与必要的研究。

更加多的人开始用于已确定系统来度量1HG高血压的实质性：幼体在显现显现出多种呼吸道自身突变时进入第1阶段，显现显现出血糖异常时进入第2阶段，显现显现出病因时进入第3阶段。一些多发呼吸道自身突变阴性的幼体，在1期和2期，实质性较太快，并发展为患病的1HG高血压。我们前描绘出了一组成员在首次扫描到多种呼吸道自身突变取样后至少10年无高血压的想像里太快实质性者，这组成员高血压人数少，但构造极为明确。随后，我们发现呼吸道自身复合物特异性CD8+T细胞会反应该在实质性缓太快的高血压里基本不发挥作用，但在更进一步患病和依然发挥作用的高血压高血压里很容易扫描到。这有可能表明，与实质性高血压相较，这些高血压自身特异性该的恒定增强。

以前研究表明，尽管恒定性T细胞会(Treg)数量长时间，但高血压高血压发挥作用一些基本功能缺陷，其里包括对IL-2的反应该操纵能力减缓。此外，高血压高血压里的波动该CD4+T细胞会有可能对恒定更具抵抗性，表现为波动该T细胞会的依赖性弱化，大自然导致的Treg和粘液导致的诱导Treg，以及复合物经历的CD4+T细胞会里IL-2反应该弱化。本研究的目的是描绘出了CD4+恒定性T细胞会(Treg)在一小群想像里缓太快实质性者里的构造，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX研究是一项以人群相结合的纵向研究，在21岁以下确诊的高血压亲属里检查1HG高血压的危险因素。我们前描绘出了依然缓太快实质性者的构造，他们维持多重呼吸道自身突变阴性少于10年，但没有显现显现出高血压的临床病因，太快性或非开展性自身免疫。随后，10名继续维持无高血压并愿意提供大量血液取样的缓太快实质性者纳入T和B细胞会基本功能系统地研究。在目前的研究里，8名太快实质性者(SP组成员)，里位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道自身突变阴性。所有的旁观者都正处于1HG高血压实质性的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身突变对某些复合物的阴性反应该，然而，一名高血压已经正处于2期至少6年，但没有显现显现出临床病因，一名高血压被诊疗为高血压，该人会72岁，在采集实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据系统地研究里对该NADP开展了单独评核。分立外周血单个核反应细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会术和T细胞会依赖性试验评核NADP里Treg的Hz、表HG和基本功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无监理聚类系统地研究，评核Treg表HG。

结果：与肥胖NADP相较，来自太快实质性体的知觉CD4+T细胞会的监理聚类表明，应答的知觉CD4+ TregHz上升，与抑制作用诱导的TNFR相关蛋白(GITR)解读上升有关。一名HbA1c升高的高血压与实质性缓太快者和匹配的对照组成员相较，Treg谱有所不尽相同。基本功能系统地研究表明，与肥胖NADP相较，来自缓太快实质性体的Treg酪氨酸的CD4+波动该T细胞会依赖性突出损伤。表现为对波动该CD4+T细胞会CD25和CD134解读的依赖性上升。

由此可知1 系统地的表HG系统地研究表明，CD4+Treg亚HG在太快实质性队列里上升。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标明物解读鉴定显现出10个元簇:知觉T细胞会_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞会;HLA-DR + GITR +知觉T细胞会;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用于9个不尽相同Treg标明分解的10个元簇的MST。每个路由器代表一个协同(100个协同)，相当大的元协同(10个元协同)在路由器组成员一处上色。每个路由器里的饼由此可知声称单个标明的解读级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以表明整体标明解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)分解由此可知，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对来说丰度为每个metacluster箱线由此可知(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组成员:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞会(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞会(l)。深蓝色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用于CITRUS的预测模HG证实，TregHz的上升是实质性缓太快的logo。国际标准门控(a - f)和甜菜系统地研究(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的logo性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读开展分立，各种类型FlowSOM群体。(b) HD(网纹)和SP(白斑)组成员以及NADPSP 606(深蓝色)里CD25+ cd127的Hz综合由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控次子集的箱线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头突显现出的簇被识别为SP和HD队列之间的不尽相同。(j)箱线由此可知表明了在SP(白斑)和HD(灰点)组成员里，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对来说丰度(数量)。(k)插值表明每个簇的表HG(紫色)和Treg标明相对来说解读与故事情节解读(蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面动身，寄存器Treg_4。故事情节与所有其他簇里标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定

由此可知3 与肥胖献血者相较，实质性缓太快者知觉treg的GITR上升。每个知觉CD4+T细胞会元簇(知觉T细胞会_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞会;HLA-DR + GITR +知觉T细胞会;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个解读标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，表明插值(c)和综合由此可知(d)。Wilcoxon配对符号秩和鉴定，p< 0.07(深蓝色)所有NADP包括，p< 0.05(蓝色)NADPSP 606和匹配的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR解读，从国际标准门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，表明插值(e)和综合由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩鉴定

由此可知4 来自缓太快实质性的CD4+ treg细胞会操纵波动该CD4+T细胞会的操纵能力减缓。SP组成员用蓝色的线和左上角声称，HD组成员用银色的线和左上角声称，深蓝色的线/左上角声称NADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标明为CFSE, Treg按捕捉到的数量滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，培育3天后开展流式细胞会术扫描。(a-d)与CD4+需要的话者相对来说应该的treg培育(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性总和。用于阴性对照(应答的响应该细胞会不含treg)计算依赖性总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统地研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 波动该CD4+T细胞会对缓太快实质性的T细胞会还原的依赖性更敏感。SP组成员用蓝色的线和左上角声称，HD组成员用银色的线和左上角声称，深蓝色的线/左上角声称NADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标明，treg按捕捉到的数量滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，培育3天后开展流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因次子系统地研究。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性百分率(b)。(c,d) CD25依赖性百分率(c)和CD134依赖性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统地研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得显现出的结论是，来自缓太快实质性次子的还原知觉CD4+Treg在GITR解读里给与了扩展和丰富，强调了进一步研究Treg在1HG高血压风险幼体里的差异性的不足之处。

原文显现引自：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28